TEV重組型蛋白酶相關(guān)小知識(shí)
更新時(shí)間：2021-04-06 | 點(diǎn)擊率：3645
蛋白酶是催化蛋白質(zhì)水解的一類(lèi)酶，是酶學(xué)研究中較早也是最深入的一種酶。重組TEV蛋白酶（GST標(biāo)簽）是煙草花葉病毒小核體蛋白a催化結(jié)構(gòu)域基因編碼的經(jīng)高度純化的制劑，該酶的生物學(xué)功能是在病毒產(chǎn)生過(guò)程中將多蛋白體酶解為單一蛋白。
和因子X(jué)a、凝血酶相比，TEV酶是識(shí)別序列更加嚴(yán)格。做為生物工程下游技術(shù)中融合蛋白酶切使用的重要工具酶，TEV酶識(shí)別非常一致的7氨基酸序列：E-Xaa-Xaa-Y-Xaa-Q-P1’(G/S)，酶切發(fā)生在Q和P1’之間的肽鍵。常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸，這樣目標(biāo)蛋白從融合蛋白的N端釋放，帶自然的N末端或者只多一個(gè)氨基酸的蛋白。該產(chǎn)品是經(jīng)過(guò)了基因工程改造的蛋白酶，穩(wěn)定性好，在廣泛的溫度范圍具有特異性。本品來(lái)源于重組大腸桿菌，經(jīng)過(guò)高度純化，比活性達(dá)到10,000U/mg。最適酶切溫度是30℃，但在4℃也具有酶活性。rTEV-H帶His標(biāo)簽，酶切后可方便地通過(guò)谷胱甘肽親和柱層析去除。酶切的條件比如：溫度、pH、DTT等可根據(jù)具體蛋白進(jìn)行優(yōu)化。
活性單位：
一個(gè)酶活性單位定義為在4℃，pH8.0條件下，12~16小時(shí)在酶切反應(yīng)緩沖液中將5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。